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本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。含有常温下完全封闭Taq酶活性的化学修饰法热启动HS Taq DNA Polymerase，能够有效抑制低温条件下引物非特异性退火或者引物二聚体引起的非特异性扩增，提高扩增反应的特异性。本试剂经过特殊配制，采用优化配方的qPCR专用Buffer，大大提高了qPCR反应的扩增效率和检测灵敏度，可以在较宽的定量区域内得到良好的标准曲线，准确进行定量。本试剂与多数厂家的荧光定量PCR仪兼容，如Applied Biosystems、Eppendorf、Bio-Rad和Roche等。

• 2×SYBR Green PCR Mastermix经过特殊配制，采用化学修饰热启动酶，具有更高特异性；
  
• 对于退火温度较低的引物或超过200bp长片段扩增建议采用三步法；
  
• 扩增前后要使用专用的区域和移液器，戴手套操作并经常更换，PCR反应完成后切勿打开反应管。以最大限度的减少PCR产物对样品的污染。

• qPCR反应体系配制：
  

  成分	25μL体系	50μL体系	终浓度
  2×SYBR Green PCR Mastermix	12.5μL	25μL	1×
  Primer 1（10μM）	0.5～2.5μL	1～5μL	0.2～1.0μM
  Primer 2（10μM）	0.5～2.5μL	1～5μL	0.2～1.0μM
  Template DNA	5μL	10μL	-
  ddH2O	至25μL	至50μL	-

• 反应程序：
  
  • 两步法：
    

    步骤	温度	时间	循环数
    热启动	95℃	3分钟	1
    变性	95℃	10～20秒	35～45
    退火/延伸	60℃	20～60秒
    融解曲线分析

  • 三步法：
    

    步骤	温度	时间	循环数
    热启动	95℃	3分钟	1
    变性	95℃	10～20秒	35～45
    退火	56～64℃	10～30秒
    延伸	72℃	10～60秒
    融解曲线分析

  对于Roche LightCycler480，热启动时间应采用10min，ABI7500也可以采用5min热启动。